自21世紀初,隨著(zhù)干細胞研究和組織工程的重大突破,類(lèi)器官及其在顯微成像中的應用取得了顯著(zhù)進(jìn)展。已開(kāi)發(fā)的多種類(lèi)器官模型,如大腦、肝臟和腸道類(lèi)器官,為研究器官發(fā)育、疾病機制揭示及治療評估提供了新途徑。同時(shí),類(lèi)器官成像技術(shù)的發(fā)展極大地促進(jìn)了研究人員對這些復雜三維結構以細節和動(dòng)態(tài)模式進(jìn)行觀(guān)察的能力。盡管如此,類(lèi)器官研究仍面臨多個(gè)挑戰,包括維持樣本活性、確保成像深度與分辨率,及處理和分析大量數據的需求。
共聚焦顯微鏡物鏡的發(fā)展,特別是用于觀(guān)察厚樣本的物鏡,對匹配樣本和周?chē)?/span>介質(zhì)的折射率至關(guān)重要,否則會(huì )影響成像深度。高數值孔徑的油浸物鏡雖然提供高分辨率,但當用于水樣本時(shí)由于折射率不匹配而面臨限制,導致球面像差。這影響了能夠有效成像的樣本深度,并降低了圖像質(zhì)量。
為了解決這些挑戰,研究人員開(kāi)始使用甘油作為一種折射率接近生物樣本的介質(zhì),將樣本置于甘油中,并使用甘油物鏡進(jìn)行成像。隨著(zhù)技術(shù)的進(jìn)步,甘油物鏡的設計和性能不斷改進(jìn),成為現代顯微鏡中常見(jiàn)的物鏡類(lèi)型之一。
如今,大多數固定樣本都使用基于甘油的Mowiol、Vectashield或類(lèi)似混合物進(jìn)行封片。這些介質(zhì)的折射率接近80/20甘油/水混合物的折射率(ne=1.45)。甘油物鏡(介質(zhì)折射率1.46)是在這種介質(zhì)中封裝的樣本的更佳選擇。
由于折射率匹配,甘油物鏡減少了散射和光損失,在廣泛的波長(cháng)范圍內都具有較好的透明度,提高了圖像質(zhì)量和信號強度,因此可實(shí)現更深的成像深度
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